Impacto del ADN extracelular presente en biofilms bacterianos en la activación de neutrófilos humanos

FUXMAN BASS, J.I.; RUSSO, D.M.; GABELLONI, M.L.; GEFFNER, J.R.; ZORREGUIETA, A. Y TREVANI, A.S

Mar del Plata, Buenos Aires

Congreso; LII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y LV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAI).; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) y Sociedad Argentina de Inmunología (SAI)

0607 IMPACTO DEL ADN EXTRACELULAR PRESENTE EN BIOFILMS BACTERIANOS EN LA ACTIVACIÓN DE NEUTRÓFILOS HUMANOS JI Fuxman Bass1 3, DM Russo2, ML Gabelloni1 3, JR Geffner1 4, A Zorreguieta2, AS Trevani1 41 IIHEMA-Academia Nacional de Medicina, 2 Fundación Instituto Leloir, 3 Depto. de Fisiología y Biología Molecular y Celular - FCEN - UBA, 4 Depto. de Microbiología e Inmunología - Fac. de Medicina - UBA Previamente demostramos que el ADN bacteriano (ADNb) activa a los neutrófilos por un mecanismo CpG- y TLR9-independiente y MyD88-dependiente. El ADNb induce la activación de neutrófilos aún no siendo endocitado, por lo que podría ser un agonista relevante en focos infecciosos con bacterias creciendo en biofilms, en los cuales el ADN extracelular (ADNe) es un componente prominente en su formación y estructura. En este estudio evaluamos el impacto de la eliminación del ADNe de biofilms de P. aeruginosa en la activación de neutrófilos humanos. Incubamos biofilms de 48 hs de formación en presencia o ausencia de DNAsa pancreática (90 U/ml) por 60 min, lavamos y confirmamos su integridad por microscopía confocal (MC). Luego co-cultivamos neutrófilos con los biofilms y evaluamos su activación determinando la liberación de IL-8 e IL-1 por ELISA, y la expresión de CD11b y CD18, y la liberación y deposición de mieloperoxidasa (MPO) sobre el biofilm por MC. El tratamiento del biofilm con DNAsa redujo marcadamente la producción de IL-8 (pg/ml IL-8: no tratado 1808±178; tratado 651±230; n=6, p<0,01) al igual que la de IL-1 (pg/ml IL-1: 427±45 no tratado; 158±75 tratado, n=6, p<0,01). Se obtuvieron resultados similares cuando los biofilms no fueron lavados luego del tratamiento con DNAsa. La expresión de CD18, cuantificada de la imagen de MC sobre 50 neutrófilos depositados sobre el biofilm, se encontró reducida cuando el biofilm fue tratado con DNAsa (UAF: 17,7±1,1 no tratado; 10,8±0,6 tratado, p<0,0001), en forma similar a lo observado con la expresión de CD11b. La deposición de MPO fue marcadamente superior y colocalizó con el ADNe en biofilms no tratados con DNAsa (coef. solapam.: 0,935). Estos resultados aportan evidencias sobre la importancia del ADNe del biofilm en la activación de neutrófilos, sugiriendo que in vivo el ADNe podría ser un componente muy relevante para inducir la activación de neutrófilos reclutados en focos infecciosos creciendo en modo biofilm.