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El melanoma cutáneo (MC) es un tumor maligno cuya tasa de incidencia y mortalidad están en aumento en varias regiones del mundo. Si el MC se detecta tempranamente, es curable por simple excisión quirúrgica; pero una vez que metastatiza, su pronóstico empeora y resulta refractario a la mayoría de las terapias. Nos propusimos desarrollar anticuerpos (Acs) mediante una nueva estrategia, como es el display en fagos de Acs de dominio único o VHHs. Los VHHs, compuestos sólo por la región variable de la cadena pesada, tienen la ventaja de identificar epítopes distintos de los reconocidos por los Acs convencionales. Para lograr el objetivo propuesto, se inmunizaron 2 llamas con 3 líneas de melanoma humano metastásico (MHM) y a partir de sangre de las mismas se construyó una biblioteca de VHHs. La biblioteca obtenida constó de tamaño adecuado (1.7 x 107 clones) y buena diversidad, identificándose post-digestión con enzimas de restricción de alta frecuencia de reconocimiento 9 patrones distintos entre 20 clones evaluados. Con el fin de enriquecer el pool de fagos-VHH de la biblioteca en Acs específicos contra melanoma, se realizaron rondas de enfrentamientos de fagos-VHH a 2 tipos celulares: células de MHM para conservar Acs que reconocen Ags tumorales, y a células negativas (eritrocitos) para sustraer Acs que reconocen Ags comunes a otras células humanas. Durante el enriquecimiento de los VHHs, se observó mediante ELISA que la reactividad del pool de fagos-VHH que reconocen Ags de MHM aumentó a medida que transcurrieron las rondas del enriquecimiento (DO490nm = 0.19, 0.45, 0.73 y 1.25, para post 1º, 3º, 4º y 5º ronda respectivamente). Con el fin de seleccionar VHHs que reconozcan Ags de membrana, se enfrentaron clones de fagos-VHH post 3ºronda a líneas y tejidos de MHM. Identificamos grupos de fagos-VHH que reconocen células tumorales en biopsias de pacientes por inmunohistoquímica. También identificamos clones reactivos contra líneas de MHM por inmunocitoquímica.