Efecto terapeutico de la aplicación de células estromales mesenquimales genéticamente modificadas para expresar el factor de crecimiento simil insulina en la fibrosis hepatica avanzada

FIORE, E; BAYO FINA, J; GARCIA, MG; MALVICINI, M; LLOYD, R; PEIXOTO, E; SOLA, M.; MARRODAN, M; ATORRAGASTI, C; PICCIONI, F; ALANIZ, L; BOLONTRADE, MF; CAFFERATA, EA; PODHAJCER, O; AQUINO, JB; MAZZOLINI, G

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Argentino de Hepatología; 2013

INTRODUCCIÓN: La cirrosis, estadío más avanzado de la fibrosis hepática, es la primera causa de trasplante hepático en la Argentina, siendo éste su único tratamiento eficaz. Las células mesenquimales estromales (MSCs) migran selectivamente hacia sitios de lesión e injuria y su potencial uso como vehículo celular de genes terapéuticos está en consideración. Se ha demostrado que el factor de crecimiento símil insulina-1 (IGF-1) tiene efecto antifibrótico, aunque hasta el momento su aplicación en estrategias terapéuticas ha tenido una eficacia limitada. OBJETIVO: Evaluar el efecto terapéutico de la aplicación de MSCs de médula ósea modificadas genéticamente para sobreexpresar IGF-1 en un modelo experimental de fibrosis hepática murino. MATERIALES y MÉTODOS: Se establecieron y caracterizaron cultivos de MSCs de médula ósea de ratones Balb/C. Éstas fueron modificadas genéticamente para expresar exógenamente IGF-1 humano o GFP (Green Fluorescent Protein; grupo control), mediante la infección in vitro con adenovirus que expresan IGF-1 (AdIGF-1)o GFP (AdGFP). El modelo experimental de fibrosis hepática consistió en la administración crónica de tioacetamida durante 8 semanas (3 dosis por semana, 200 mg/kg ratón/ dosis; intraperitoneal) a ratones Balb/C. Se utilizaron 3 grupos experimentales (n=10 por grupo): control sin transplante de MSCs (vehículo), control con transplante de MSCs (AdGFP-MSCs) y tratamiento experimental (AdIGF-1-MSCs). El efecto terapéutico se evaluó por tinciones histológicas, análisis morfométrico y qPCR de muestras de hígados de ratones de los distintos grupos. Se aplicó el test estadístico de t-Student o de Mann-Whitney, según correspondía. RESULTADOS: Los cultivos celulares generados presentaron las características fenotípicas y de capacidad de diferenciación propias de MSCs. Se establecieron las condiciones de infección a las cuales la expresión del transgen fuese máxima sin afectar significativamente las propiedades celulares (viabilidad, crecimiento y migración; MOI: 30), a 3 días post-infección. Por radio-inmunoensayo se confirmó la sobreexpresión del transgen en el sobrenadante de las AdIGF-1-MSCs. Las células fueron administradas al tercer día post-infección y tras 6 semanas de tratamiento con TAA, y se analizó el efecto terapéutico in vivo a dos semanas post-tratamiento. Se pudo comprobar que la aplicación de AdGFP-MSCs redujo el grado de fibrosis hepática, efecto que fue significativamente mayor en los animales tratados con AdIGF-1-MSCs. Mediante qPCR se detectó el mismo patrón en los niveles de expresión de Col1a y TGF-b, genes asociados al proceso fibrogénico. CONCLUSIÓN: Nuestros resultados nos permiten concluir que las MSCs modificadas genéticamente para sobreexpresar IGF-1 ejercerían un potente efecto anti-fibrogénico y sugieren su potencial empleo como vehículo de genes terapéuticos para el tratamiento de la fibrosis hepática avanzada.