Generación de una proteína quimérica con capacidad agonista TLR4-TLR5

YANINA HIRIART; ANDRÉS HUGO ROSSI; AGUSTINA ERREA; GRISELDA MORENO; VANINA A. ALZOGARAY; FERNANDO A. GOLDBAUM; PAULA M. BERGUER; MARTIN RUMBO

Mar del Plata

Congreso; LX Reunión científica anual de la sociedad Argentina de inmunología - SAI; 2012

Sociedad Argentina de Inmunología

Los agonistas de distintos TLRs han cobrado interés en los últimos años por su potencial aplicación como adyuvantes vacunales. Lumazina sintetasa de B. abortus (BLS) es una proteína decamérica que actúa como carrier de antígenos fusionados a su extremo N-terminal y es capaz de activar y madurar células dendríticas vía TLR4. Flagelina (FliC) es el monómero estructural del flagelo bacteriano y por su capacidad agonista de TLR5 ha sido propuesta como adyuvante. El objetivo del presente trabajo fue generar una proteína de fusión con la hipótesis de que la combinación de ambos agonistas en una misma estructura generaría un producto con propiedades biólogicas de interés en el campo de los adyuvantes vacunales. Se generó una construcción insertando una secuencia codificante para FliC de S. tiphimurium en el extremo N-terminal de BLS. Se la expresó en un sistema bacteriano y purificó por cromatografía de afinidad utilizando anticuerpos monoclonales anti-FliC generados en nuestro laboratorio. El análisis por SDS-PAGE mostró una banda del tamaño esperado (52 kDa) que mostró reactividad por westernblot con anticuerpos anti-FliC y anti-BLS. La quimera mostró capacidad agonista TLR5 al estimular la línea reportera Caco-CCL20-luciferasa, que responde a flagelina pero no a otros agonistas de TLRs. La actividad agonista de TLR4 se demostró en un cultivo primario de células adherentes de bazo, poco respondedoras a agonistas TLR5, que produjeron IL-6 frente a la estimulación con la quimera o con BLS. Luego de estimular por vía intranasal o peritoneal animales C3H/HeJ, no respondedores vía TLR4, se analizaron las poblaciones reclutadas por citometría de flujo. En ambos casos el reclutamiento de neutrófilos en respuesta a la quimera fue comparable al inducido por flagelina. Los resultados obtenidos indican que se ha obtenido una proteína quimera BLS-FliC con capacidad agonista para las vías de TLR4 y TLR5 en la misma molécula, con potenciales aplicaciones en el campo de la vacunación.