IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
Metodologia para el estudio de tumores solidos por microdiseccion laser.
Autor/es:
LEVY ESTRELLA, BIANCHINI MICHELE, BRAVO ALICIA, FURMAN DAVID, VON EUW ERIKA, DOMENICHINI ENZO,PINSKY VICTOR, BARRIO MARCELA, MORDOH JOSÉ
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; : LI Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina De Investigacion Clínica - LIV Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina De Inmunologia; 2006
Resumen:
El desarrollo y la aplicación de las técnicas de microdisección laser (MDl) ha generado un importante avance en el análisis molecular de tumores sólidos y su microambiente. En el presente trabajo hemos comparado alternativas de conservación de muestras de carcinoma de colon, mama y melanoma para MDl y posterior extracción de RNA y proteínas. Para conservar los teji-dos se utilizó:i) fijación en formol y RNAlater (Ambion) a temperatura ambiente y posterior inclusión en parafina o ii) congelación a -SO°C y posterior inclusión en OCT-optimal cutting temperature. luego se procedió a microdisecar dichas muestras utilizando un microscopio leica laser Microdissection "ASlMD". los cortes-lá-ser (Cl) se colectaron en buffer de extracción para RNA (RNAqueous"'-Micro) o en buffer RIPA para proteínas. El RNA Y las proteínas extraídas fueron cuantificadas obteniéndose valores de aproximadamente 400 ng de RNA en Cl correspondientes a 600 células y 1 IJg de proteínas en Cl conteniendo 2.500 células. El análisis posterior por RT-PCR y western blot, permitió evaluar transcriptos y proteínas de diferentes tamaños y abundancia. Se obtuvieron resultados positivos en la amplificación de los transcriptos rl2-m y GAPDH en los tejidos mencionados. En el caso de transcriptos menos abundantes y de expresión restringida como PAK6, FKBP6 Y CSPG3, su detección dependió de la celularidad, tipo celular y tamaño del amplicón. Se logró establecer que el número mínimo requerido para la amplificación de un transcripto está entre 100 Y 1.000 células; en el caso de las pro-teínas es necesario procesar un número mayor de células (de 1.000 a 10.000). logramos extraer RNA de buena calidad de los Cl fijados en formol previo tratamiento con RNA later, lo cual constituye una ventaja en cuanto a la preservación y estudio morfológico. En conclusión, este trabajo nos permitió establecer una metodología para analizar los componentes individuales de tejidos tumorales heterogéneos.