La tasa de internalización del TCR en linfocitos MART-1 específicos aumenta con la concentración de tetrámeros de MHC

FURMAN DAVID, VON EUW ERIKA, LEVY ESTRELLA, BARRIO MARÍA MARCELA, BIANCHINI MICHELE, MORDOH JOSÉ.

Mar del Plata

Congreso; : LI Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina De Investigacion Clínica - LIV Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina De Inmunologia; 2006

SAIC

La función efectora de linfocitos T citotóxicos (CTL) depende de la interacción del TCR con complejospéptido-MHC en la cé-lula blanco y puede ser modulada por la internalización del TCR. Se ha sugerido que células tumorales o infectadas con virus pue-den escapar al ataque inmune por selección de variantes con baja o nula expresión de moléculas MHC. El objetivo del presente tra-bajo es estudiar la velocidad de internalización del TCR (viTCR) en repuesta a distintas concentraciones de tetrámeros MHC (tMHC) (ligando) y determinar si la unión del ligando induce una respuesta efectora en forma dosis-dependiente. Se utilizó un clon de linfocitos CD8+ específicos para MART-1 (AAGIGILTV) restrictos para HLA A-0201 que fueron incubados con distintas concentraciones de tMHC, y se midió la fluorescencia (MFI) en el tiempo (O a 120 minutos) por citometría de flujo. Con el objeto de estimar el número de receptores ocupados para cada MFI, se utilizaron microesferas marcadas con cantidades conocidas del fluoróforo ficoeritrina (QuantiBRITES). Para determinar el efecto de la unión de tMHC al por ELlSA. Las yTCR sobre la función efectora, se midió la producción de IFN- células fueron observa-das por microscopía contocal para determinar la ubicación subcelular del TCR luego de su internalización. Hemos observa-do que a una concentración saturante de tMHC (12 IJg/ml) corres-pondiente a una ocupación inicial estimada de 105.100 TCR/cé-lula, la viTCR es de 380 TCRmin-1, mientras que a concentraciones sub-saturantes de tMHC, la viTCR disminuye en forma logarítmica. Se detectó producción de IFN-y dosis-dependiente a partir de una ocupación de 360 TCR/célula. Nuestros resultados indican que la tasa de internalización del TCR aumenta con la concentración de tMHC y que la ocupación mínima para inducir producción de IFN-y detectable es de 360 TCR. Estudios poste-riores permitirán dilucidar el destino del TCR en distintas condi-ciones de ligando y su implicancia en la respuesta T.