Celulas dendríticas humanas cargadas con celulas de melanoma apoptoticas efectuan eficientemente presentación cruzada de antìgenos específicos a linfocitos T citotoxicos.

VON EUW ERIKA MARIA, BARRIO MARIA MARCELA, LEVY ESTRELLA MARIEL, FURMAN DAVID, BIANCHINI MICHELE, MORDOH JOSÉ

Mar del Plata

Congreso; LI Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina De Investigacion Clínica - LIV Reunion Cientifica de la Sociedad Argentina de Inmunologia; 2006

Sociedad Argentina De Investigacion Clínica

Resultados previos. de nuestro laboratorio en melanoma murino B16 demostraron que Ia vacunacion con células dendríticas (CDs) cargadas con células tumorales (CT) apoptóticas inducía protección duradera contra un desafío con CT vivas. En al presente trabajo in vitro, utilizando CDs inmaduras humanas y una mezcla de líneas celulares de melanoma humano apoptóticas(APO), analizamos la fagcitosis, maduración y presentación antigénica. A partir de monocitos de sangre periférica de dado-res sanos se obtuvieron CDs inmaduras (CD1a+/CD11c+./CD14-) incubando con IL-4 (50 ng/ml) y GM-CSF (800 UI/mI). La apoptosis de las CT fue inducida por radlación gama (70Gy), observandó-se por FACS 40 +-10% Anexina V ·FlTC. y 12 +- 4.5% Anexina V - FITC+ Ioduro de Propidio+. Tras cocultivar CDs y APO marcadas previamente con PKH26 y PKH6, analizamos la cinética de fagocitosis por FACS Y microscopía electrónica. Se observó ya a las 6 hs post·incubación que las CDs inmaduras fagocitan APO, con un máximo de 55 +- 10,5% a las 48hs.. La fagocitosis indujo maduración de las CDs según: I) dismlnución de la endocitosis de Dextrano-FITC (CDs lnmaduras 81 +- 5%; CD/APO 33 +- 12%): .ii) expresión aumentada de CD80, CD86, CD83, CD40, CCR7, HLA·1 y HLA·II, comparable a la inducida por LPS; iii) aumento de la migración de las CD/APO en respuesta a MIP3-ß (ensayo en cámara modificada de Boyden), Los cocultivos CDs HLA--A0201/APO indujeron a partir de 6hrss de coincubación la secreción de lNFy (> 600 pg/ml) por un clon de Iinfocitos T CD8+ específico para el péptido AAGIGILTV del antígeno MelanA/Mart-1, evidenciando presentación antigénica cruzada luego de la fagocitosis de APO