Rol de la proteína GBF1 en la localización subcelular de la proteína de cápside del virus del dengue.

IGLESIAS, N.G.; SAMSA, M.M.; MONDOTTE, J.A.; GAMARNIK, A.V.

Valle Hermoso, Córdoba

Congreso; XXXII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Virología; 2012

Sociedad Argentina de Virología

El virus del dengue pertenece, al igual que otros virus de importancia para la salud humana, a la familia Flaviviridae. Posee un genoma de ARN simple cadena de polaridad positiva de aproximadamente 11 Kb, el cual es traducido en una poliproteína precursora de 10 proteínas virales, 3 estructurales (C-prM-E) y 7 proteínas no estructurales (NS1-NS2a-NS2b-NS3-NS4a-NS4b-NS5). Durante la replicación viral las moléculas de ARN son reclutadas por la proteína de cápside (C) para la formación de la nucleocápside viral. Este complejo es transportado hacia el lumen del retículo endoplásmico (ER) por gemación, donde adquiere la bicapa lipídica junto con las proteínas estructurales prM y E. Recientemente se descubrió en el laboratorio que la proteína C se acumula en la superficie de unas organelas derivadas del ER denominadas Lipid droplets (LD).Los complejos COPI y COPII (coat protein I and II)  son componentes esenciales de la maquinaria molecular que media el transporte entre el ER y el Golgi. Estudios recientes han demostrado un nuevo rol para estos complejos en el transporte de proteínas asociadas a LDs, estos complejos participan en el transporte de proteínas a la superficie de los LDs. En particular, COPI y sus reguladores, la GTPasa ARF1 y su factor de intercambio de GTP (GEF) GBF1, participan en el transporte de las proteínas celulares ATGL y ADRP a los LDs, pero otras proteínas celulares asociadas a LDs, como por ejemplo TIP 47, no utilizan esta vía de tráfico vesicular.Para definir la relevancia de COPI en el tráfico de C  a los LDs, analizamos el efecto de la droga Brefeldina A (BFA) sobre la localización de C. BFA es un inhibidor de GBF1, el GEF responsable de activar ARF1. Al incubar células A549 infectadas con el virus del dengue con BFA se observó una deslocalización de la proteína C de la superficie de los LDs, mientras que la proteína TIP47 permanece unida a estas organelas. Posteriormente,  se analizó el efecto de componentes de la vía de COPI constitutivamente activos y dominantes negativos, se analizó el dominante negativo de GBF1 E794K, el constitutivamente activo M832L, el cual es resistente a BFA, y el WT.  Posteriormente, estos resultados se confirmaron mediante la utilización de RNA de interferencia contra GBF1. Se observó mediante inmunofluorescencia que la proteína de cápside de dengue sólo se encontraba en la superficie de los LDs en las células que expresaban GBF1. Estos resultados confirman la participación de la proteína GBF1 en la localización de la proteína de cápside del virus del dengue en la superficie de los lipid  droplets.