IIBBA   05544
INSTITUTO DE INVESTIGACIONES BIOQUIMICAS DE BUENOS AIRES
Unidad Ejecutora - UE
congresos y reuniones científicas
Título:
INHIBICIÓN DE POSIBLES REGULADORES DE LA PRODUCCIÓN PLAQUETARIA EN MEGACARIOCITOS (MK) PRIMARIOS MEDIANTE ARN DE INTERFERENCIA
Autor/es:
GLEMBOTSKY A.; BENEDETTI L; MARTA R; RASLOVA H; PODHAJCER O; MOLINAS F; HELLER PG
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LVI Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
Previamente hallamos disminución del receptor c-mpl y de NF-E2 en pacientes con Trombocitopenia Hereditaria causada por mutación del factor de transcripción RUNX1, comprobándose que ambos son blancos del RUNX1 en el MK. Para identificar nuevos reguladores de la producción plaquetaria entre los genes regulados por RUNX1, se inhibió la expresión del factor de transcripción ID1, el cual se halló disminuido en estos pacientes y cuyo rol en la megacariocitopoyesis no ha sido investigado. Se realizó silenciamiento de ID1 en progenitores CD34+ de cordón umbilical mediante ARN de interferencia, evaluándose el efecto en la megacariocito y trombopoyesis. Se efectuó transducción de CD34+ con lentivirus conteniendo shRNA-ID1 obtenidos en células 293FT, con eficiencia 26% en cultivos shRNA-ID1 y 21% en control. Una vez purificada esta población mediante sorting de CD34+GFP+ 48hs post-transducción (pureza 95% y 92%, respectivamente), se cultivó con TPO. Se halló inhibición de la diferenciación hacia MK (CD41+) de las CD34+ transducidas con shRNA-ID1 respecto al control, 64,1% vs 70,8% CD41+, y disminución de la maduración MK, evidenciada por % MK maduros, 29,2% vs 41,6% CD41+CD42b+, y por la fluorescencia (Gm) 42b, 41,3 vs 61,3. Contrario a lo observado en la megacariocitopoyesis, no se halló inhibición de la trombopoyesis, número de proplaquetas en cultivos shRNA-ID1 vs control, 16 vs 13. A pesar de las diferencias fenotípicas halladas en las células tratadas con shRNA-ID1, no se observó disminución del ARNm para ID1 mediante PCR en tiempo real, ΔCt ID1-GAPDH 4,96 vs 4,90, por lo cual se evaluará si la inhibición de la megacariocitopoyesis se debe a un efecto del shRNA en la traducción proteica de ID1. En conclusión, considerando la dificultad existente en la transfección de CD34+ y MK, esta metodología resultó adecuada para evaluar el efecto del silenciamiento génico en MK primarios. La inhibición observada en la megacariocitopoyesis sugeriría un posible rol de ID1 en este proceso.