La estimulación con citoquinas de maduración cambia la interacción entre células humanas de melanoma apoptóticas-necróticas irradiadas y células dendriticas derivadas de monocitos

PIZZURRO GABRIELA A.; MADORSKY ROWDO FLORENCIA P.; COPATI ANDREA M.; PUJOL-LEREIS LUCIANA M.; QUESADA-ALLUÉ LUIS A.; ROBERTI MARÍA P.; TEILLAUD JEAN-LUC; LEVY ESTRELLA M.; BARRIO MARÍA M.; MORDOH JOSÉ

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

El rol de las células dendríticas (CD) en la inmunidad anti-tumoral está en estudio. Previamente demostramos que cocultivando CD inmaduras (CDi) con células de melanoma cutáneo (CMC) irradiadas a 70 Gy (RT), se obtiene una vacuna (CD/Apo-Nec), que presenta con eficiencia los antígenos (Ags) MART-1 y gp100 a linfocitos T CD8+. En este trabajo, analizamos la interacción entre CD y CMC RT. 48h post-RT, las CMC presentaron 12,2% necrosis, 16,2% apoptosis temprana y 55,8% apoptosis tardía (Apo-Nec). Por tinción con BODIPY 493/503 se determinó un aumento de vesículas lipídicas en Apo-Nec 24-48h post-RT, disminuyendo a las 72h post-RT. En el análisis bioquímico se vio el doble de triglicéridos y el triple de fosfatidilcolina, esfingomielina y fosfatidiletanolamina que en CMC viables. Dada la variación en contenido lipídico, presunto inhibidor de presentación de Ags, comparamos el cocultivo de CDi con Apo-Nec 0h-post-RT (Apo- NecT0) y 72h-post-RT (Apo-NecT72). En ambos casos, CD/Apo-Nec mostró niveles intermedios de maduración respecto de CD+LPS (ej. CDi/ CD/Apo-NecT0/ CD+LPS CD80: 10,9±6,9%/ 29,8±14,1%/ 52,9±25,4%; CD83: 8,4±4,5%/ 9,2±3,0%/ 28,1±23,8%). Ambos cocultivos presentaron eficientemente MART-1 a un clon CD8+ específico (CDi/ CD/Apo-NecT0/ CD/Apo-NecT72 1852±13/ 7011±93/ 8665±85 pg/ml IFNγ), pero fueron pobres estimuladoras de una reacción linfocitaria mixta (MLR) (CDi/ CD/Apo-NecT0/ CD/Apo-NecT72 1490±360/ 2002±803/ 1590±730 cpm 3[H]dTd). Cuando se agregó un cóctel de citoquinas (CC) (TNFα, IL1β, IL6 y PGE2) al cocultivo, la maduración de CD/Apo-Nec fue más consistente (ej. CD/Apo-NecT0/ CD/Apo-NecT72 CD80: 71,9±14,6%/ 73,0±21,0% CD83: 64,2±10,2%/ 58,3±23,2%), se generó una MLR robusta (p