La proteína bacteriana BLS induce presentación cruzada de péptidos y citotoxicidad específica dependiente de TLR4.

BERGUER PAULA; ALZOGARAY VANINA; ROSSI ANDRÉS; PIAZZON ISABEL; GOLDBAUM FERNANDO

San Miguel de Tucumán

Mesa redonda; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2011

Sociedad Argentina de Inmunología

La enzima lumazina sintetasa de Brucella spp. (BLS) es una proteína decamérica altamente estable e inmunogénica. Se ha demostrado que BLS es capaz de producir altas respuestas inmunes, tanto celulares como humorales, utilizando diferentes vías de inoculación y diferentes formulaciones. Por ejemplo, BLS es altamente inmunogénica como vacuna a DNA o como proteína aislada en ausencia de adyuvantes. También es un potente inmunógeno cuando es suministrada por vía oral. Mediante ingeniería de proteínas, hemos demostrado que es posible decorar a BLS con diez copias de péptidos o dominios proteicos foráneos, produciendo una alta respuesta inmune específica contra los antígenos insertados. Estas proteínas quiméricas pueden ser desplegadas, mezcladas y replegadas, permitiendo la generación de quimeras mixtas, las que son capaces de presentar al sistema inmune distintos antígenos en forma simultánea. En resumen, BLS constituye un “scaffold” altamente flexible y eficiente para el desarrollo de nuevas vacunas moleculares contra enfermedades infecciosas, y para la inmunomodulación de enfermedades alérgicas, neurodegenerativas y autoinmunes. Dichas proteínas quiméricas contienen péptidos de largo y composición variable, pertenecientes a proteínas inmunogénicas de numerosos patógenos. Este sistema de presentación antigénica tiene la ventaja de presentar los péptidos y proteínas insertadas en forma repetida y espacialmente ordenada, aumentando su estabilidad y vida media. Hemos demostrado que BLS es un potente activador de células dendríticas en forma TLR4-dependiente, explicando en parte su alta inmunogenicidad, ya que esta activación potencia la respuesta innata, y hace que la respuesta adaptativa específica sea mayor. Además, hemos desarrollado una proteína de fusión entre BLS y flagelina (FliC) de Salmonella typhimurium, ligando de TLR5 e importante activador de la respuesta innata con propiedades de adyuvante mucosal. Nuestros resultados preliminares muestran que BLS-FliC es capaz de activar en forma simultánea a TLR4 y TLR5, convirtiendo a esta quimera en un vehículo y adyuvante interesante para inmunización por via mucosal. Estamos estudiando el tráfico intracelular de BLS y BLS-FliC mediante microscopia confocal. Resultados preliminares muestran un comportamiento muy particular de estas proteínas en su interacción con macrófagos y células dendríticas. Además, mediante la utilización de ratones transgénicos y una quimera conteniendo 10 copias del péptido OVA257-264, hemos demostrado que BLS induce presentación cruzada y una fuerte respuesta citotóxica específica en ausencia de adyuvantes. La asociación de péptidos a la estructura de BLS induce una rápida activación y proliferación de linfocitos CD8+ específicos. Esos linfocitos adquieren el fenotipo de células efectoras. Este efecto, que es dependiente de TLR4, convierte a BLS en un carrier potente para el desarrollo de vacunas acelulares.