CARACTERIZACIÓN DE LA MODULACIÓN DEL FACTOR DE TRANSCRIPCIÓN NFkB MEDIADA POR PROTEÍNAS FKBPS

ERLEJMAN AG, MOLINARI AM, MAZAIRA GI, GALIGNIANA MD

Mar del Plata

Conferencia; LVI Reunion Anual de SAIC; 2011

SAIC

El factor de transcripci¨®n NF-¦ÊB (RelA/p50) regula genes involucrados en la inflamaci¨®n, diferenciaci¨®n y muerte celular. Su activaci¨®n es mediada por la fosforilaci¨®n del inhibidor l¦ÊB y posterior degradaci¨®n, lo que libera a NF-kB para translocar al n¨²cleo. Previamente observamos que las FK506 binding proteins (FKBPs) modulan la actividad transcripcional NF-¦ÊB. Las FKBPs se caracterizan por presentar un dominio con actividad enzim¨¢tica de peptidil-prolil-cis/trans-isomerasa (PPIasa) y un dominio TPR (series de 34 aa) de interacci¨®n con otras prote¨ªnas. El objetivo de este trabajo fue estudiar las caracter¨ªsticas de esta modulaci¨®n. En c¨¦lulas HEK 293T estimuladas con PMA (100ng/ml) se analiz¨® la inducci¨®n de un gen reportero con sitios promotores para NF-¦ÊB. Mientras que FKBP51 mostr¨® efectos inhibitorios, FKBP52 mostr¨® un efecto amplificador de la respuesta, el que fue revertido por FKBP51. Asimismo, no se observ¨® estimulaci¨®n en la actividad de NF-¦ÊB inducida por PMA en c¨¦lulas HEK 293 transfectadas con FKBP52 que sobreexpresan de manera estable a FKBP51. La preincubaci¨®n con FK506 (inhibidor de la actividad PPIasa) previno la estimulaci¨®n mediada por FKBP52 sin afectar el efecto inhibitorio de FKBP51 sobre NF-¦ÊB. La cotransfecci¨®n del dominio TPR disminuy¨® por competencia el efecto modulador observado para ambas FKBPs. Se estudi¨® la cin¨¦tica de translocaci¨®n nuclear de NF-¦ÊB por IFI, observ¨¢ndose que FKBP52 aument¨® el tiempo de permanencia de NF-¦ÊB en el n¨²cleo, mientras que FKBP51 inhibi¨® parcialmente su translocaci¨®n nuclear. FKBP51 coinmunoprecipit¨® con RelA en condiciones basales, siendo el complejo disociado en c¨¦lulas estimuladas con PMA. Concluimos que FKBP51 y FKBP52 modulan la actividad transcripcional de NF-¦ÊB actuando en forma contrapuesta, siendo relevante la actividad PPIasa de FKBP52 as¨ª como la interacci¨®n v¨ªa dominios TPR con otras prote¨ªnas. Este efecto tiene lugar tanto a nivel de la translocaci¨®n de NF-¦ÊB y/o en su sitio promotor.