El truncamiento de un barril beta disocia la estabilidad intrínseca de la tendencia a la agregación

LUCRECIA M. CURTO; CARLA R. ANGELANI; INES S. CABANAS; CARAMELO J; DELFINO J

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Y98Y es una variante abreviada y funcional de la proteina que une acidos grasos de intestino de rata IFABP. Esta ultima es un barril β formado por dos hojas ortogonales de cinco hebras cada una. Y98Y (29-126 de IFABP) carece de la hebra A, la mayor parte del motivo helice-vuelta-helice, interpuesto entre A y B, y de los ultimos 5 aminoacidos. Y98Y es monomerica y conserva el core hidrofobico compacto de IFABP.Asimismo, la existencia de una periferia laxa le confiere una estructura levemente expandida, rindiendo una construccion con menor estabilidad conformacional1,2. Por carecer del cierre del barril β, esta variante podria presentar bordes libres, no obstante no se observo tendencia a la agregacion. Esta observacion se contrapone a la nocion de que perturbaciones de la estructura nativa generalmente conducen a especies con mayor tendencia a la agregacion. En este sentido, Y98Y exhibe un comportamiento muy similar al de IFABP frente a la agregacion inducida por trifluoroetanol (TFE). Ambas proteinas agregan  maximamente a 25 % TFE, siguiendo un mecanismo simple de nucleacion-elongacion. La naturaleza amiloide de estos agregados fue comprobada mediante ensayos de union a colorantes (Tioflavina-T y Congo Red) y microscopias (TEM y birrefringencia a la luz polarizada). Adicionalmente, se estudio la influencia de dicho co-solvente sobre la conformacion mediante metodos espectroscopicos (dicroismo circular y fluorescencia), poniendo en evidencia la mayor flexibilidad conformacional de la variante abreviada. Se destaca la preservacion del core en el comportamiento general de ambas estructuras.