Purificación y caracterización de la proteína NS1 del virus respiratorio sincicial humano

ESTEBAN PRETEL; MARIANA GALLO; DANIEL CICERO; GONZALO DE PRAT GAY

Congreso; XL Reunión Anual de Biofísica; 2011

El virus respiratorio sincicial humano (RSV) es el agente causal mas importante de enfermedad respiratoria pediátrica en el mundo. El virus codifica a dos proteínas no estructurales: NS1 y NS2 las cuales solo se encuentran en RSV. Ambas participarían en la supresión tanto de la producción como señalización de interferón. A pesar de su relevancia, hasta el momento no se conocen estudios que analicen en profundidad la estructura de estas proteínas, así como falta información acerca de su función y de los mecanismos en que los efectos mencionados se producen. En el presente trabajo se muestra la purificación y caracterización inicial de la proteína NS1 A2. La misma fue expresada en la cepa C41 de E. coli utilizando el vector pET-15 b. Se obtuvo un buen rendimiento de proteína utilizando en pasos sucesivos precipitación fraccionada con sulfato de amonio al 50%, columna de afinidad por Níquel, corte con trombina y filtración por tamiz molecular. NS1 es una proteína monomérica estable en un amplio rango de ph, mostrando un desplegamiento cooperativo cuando se la expone a agentes caotrópicos como cloruro de guanidinio. El aumento de temperatura provoca un cambio irreversible que se refleja tanto en su estructura secundaria como cuaternaria. Para su estudio por RMN se puso a punto la expresión en medio mínimo y marcación con 15N y 13C. Se analizaron diferentes condiciones en relación a temperatura, estabilidad y pH que servirán como punto de partida para realizar los experimentos de asignación.