Una nueva actividad de "annealing" de ARN de la helicasa NS3 del virus del denngue

LEOPOLDO G. GEBHARD; SERGIO B. KAUFMAN; ANDREA V. GAMARNIK

Ciudad de Buenos Aires

Encuentro; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Las estructuras secundarias y terciarias del ARN presentes en los genomas virales son cruciales para la replicación viral [1]. Sin embargo, poco se sabe acerca de los procesos que regulan su formación y su dinámica. En este estudio, hemos investigado las propiedades de la proteína NS3 del virus del dengue en lo que respecta a su capacidad para modular la formación de estructuras de ARN. Utilizando ensayos in vitro evaluamos las reacciones de desdoblamiento e hibridización del ARN. Además de la capacidad de NS3 de desdoblar dúplex de ARN en presencia de nucleótidos trifosfatos, se descubrió que esta proteína es capaz de facilitar la hibridización de moléculas de ARN de secuencias complementarias en ausencia de dichos nucleótidos. Se identificó así una nueva actividad de “annealing” de cadenas complementarias de ARN en la proteína NS3 del virus del dengue. En contraste con los requerimientos para la actividad helicasa, hemos demostrado que esta actividad “annealasa” no requiere ATP. La proteína NS3 viral establece un estado estacionario dependiente de ATP entre el desdoblamiento y la hibridización del ARN, lo que permite la modulación de las dos actividades opuestas de esta enzima a través de la concentraciónde ATP. Nuestros resultados aportan nueva información en cuanto al papel funcional de la proteína NS3 del virus del dengue en la regulación de las estructuras y el metabolismo del ARN viral. La capacidad de la NS3 de impulsar la reacción de desdoblamiento, activar la hibridización del ARN y el recurso de modular diferencialmente estas actividades, ofrece nuevas ideas de cómo los virus logran regular la conformación del ARN en las diferentes etapas del ciclo de replicación viral. Dado que el virus del dengue es un importante patógeno humano, consideramos que el conocimiento de las propiedades de esta proteína viral puede aportar información para el desarrollo de nuevas estrategias antivirales.1. Leopoldo G. Gebhard, Claudia V. Filomatori & Andrea V. Gamarnik. Functional RNAElements in the Dengue Virus Genome. Viruses 2011, 3, pp. 1739-1756.Agradecimientos: CONICET