Modulación de una estructura intrínsecamente desordenada por cationes bivalentes: la oncoproteína E7 del virus del papiloma humano.

NOVAL, MG; CHEMES, L.B.; SALVAY, A; DE PRAT-GAY, G.

Ciudad de Buenos Aires

Congreso; XL Reunión de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Las proteínas intrínsicamente desordenadas (IDPs) carecen de estructura secundaria o terciaria canónica en condiciones fisiológicas. Sin embargo, poseen distintas regiones con tendencias estructurales locales, que le permiten adoptar múltiples conformaciones pudiendo así interactuar con una gran cantidad de proteínas blanco. La oncoproteína E7 del virus de papiloma humano (HPV) es la principal responsable de su actividad transformante, principalmente mediante su interacción con la proteína supresora de tumores retinoblastoma (pRb). Nuestro grupo ha demostrado que el dominio amino terminal de E7 (E7N) el cual media la interacción con un gran número de blancos celulares, es IDP1. Se postuló que el calcio es esencial para la degradación de pRb mediada por E7, sugiriendo que E7 podría interactuar con cationes bivalentes2. Con el objetivo de caracterizar esta interacción, estudiamos el efecto del Ca2+, Mg2+ y Mn2+ sobre la proteína E7 HPV-16 y su dominio E7N. Encontramos que concentraciones entre 100 μM y 1 mM inducen cambios de la estructura en solución tanto de la proteína como del dominio. Titulaciones con trifluoroetanol (TFE) mostraron que el calcio aumenta la tendencia del dominio E7N a formar alfa hélice. Además, experimentos de cromatografía de exclusión molecular y ultracentrifugación analítica muestran que estos cambios conformacionales van acompañados de cambios en el radio hidrodinámico. Mediante el uso de péptidos sintéticos, el sitio de interacción fue mapeado a los residuos 16-40, una región rica en aminoácidos ácidos. Finalmente, ampliamos nuestro estudio a los dominios E7N de las cepas de alto riesgo HPV18, de bajo riesgo HPV11 y bovina BPV1. Observamos una correlación entre el potencial transformante y la capacidad de estas proteínas de ser moduladas por calcio. En su conjunto, nuestros resultados muestran que la interacción con cationes divalentes amplía el repertorio conformacional del dominio IDP E7N, y sugieren un rol funcional de estas interacciones. 1. Garcia-Alai et al. Biochemistry 46:10405-10412. 2. G. A. Darnel