Tolerancia al daño genómico luego de irradiación UVC, nuevas funciones para CHK1 en la coordinación de la síntesis por translesión.

JULIANA SPERONI; BELEN FEDERICO; SABRINA MANSILLA; VANESA GOTTIFREDI

Mar del Plata

Congreso; LV Reunión científica anual de Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC), Reunión cientifica anual de la Sociedad Argentina de Fisiología (SAFIS)y XLII Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Farmacología Experimental (SAFE); 2010

Sociedad Argentina de Investigación Clinica

Diversos mecanismos celulares están encargados de proveer tolerancia al daño genómico al momento de la replicación de ADN. Entre éstos se destacan la vía de chequeo y la síntesis de ADN por Translesión (TLS). La vía de chequeo se activa por aumento de ADN simple cadena que resulta de la acumulación de horquillas asimétricas asociadas a problemas de replicación. La TLS evita la acumulación de horquillas de replicación atascadas mediante el intercambio de polimerasas replicativas por polimerasas permisivas menos fieles con sitios activos laxos que aceptan bases dañadas como molde. Evidencia experimental obtenida en nuestro laboratorio que permitió demostrar que la modulación negativa de diversas proteínas de chequeo afecta las señales moleculares asociadas a la TLS y la eficiencia del proceso de TLS en sí en presencia de daño genómico. El objetivo de este trabajo fue caracterizar el mecanismo mediante el cual la proteína efectora y principal de la vía de chequeo, Chk1, es capaz de coordinar la TLS después de UV. Para esto, se utilizó como estrategia experimental la modulación negativa de Chk1 con siRNAs e inhibidores químicos. Por otro lado se hicieron mutantes refractarios al siRNA de Chk1 a los cuales se les mutagenizó el dominio de actividad quinasa (KD) y el dominio de unión a PCNA (PIP) y se estudió su efecto sobre marcadores conocidos de TLS como la modificación post-traduccional (ubiquitinación) de la plataforma de cargado de polimerasas PCNA y la organización de una polimerasa permisiva, Polh, en estructuras focales después de UV. Por otro lado, se analizó la mutagénesis asociada a una activación deficiente de TLS y se estudiaron cambios en la velocidad de avance de horquillas de replicación mediante análisis de moléculas únicas de ADN. Nuestros datos indican que la función de Chk1 sobre la síntesis por Translesión no está relacionada a su actividad quinasa. Este descubrimiento es verdaderamente importante ya que todas las funciones conocidas de Chk1 dependen de su capacidad para fosforilar  proteínas. Demostramos además la existencia de un nuevo dominio mediante el cual Chk1 sería capaz de regular a la TLS.